本法多用于紙片擴散法藥敏試驗的細(xì)菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面，然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片，或直接培養(yǎng)，本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌形成菌苔。

        細(xì)菌的培養(yǎng)方法
 

        根據(jù)不同的標(biāo)本及不同的培養(yǎng)目的，可選用不同的培養(yǎng)方法。通常把細(xì)菌的培養(yǎng)方法分為需氧培養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)、微需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)四種。

        1．需氧培養(yǎng)

        是指需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養(yǎng)，將已接種好的平板、斜面、液體培養(yǎng)基等在空氣中置35℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育18~24h，無特殊要求的細(xì)菌均可生長。少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)3-7d甚至1個月才能生長。為使孵育箱內(nèi)保持一定的濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。對培養(yǎng)時間較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞好棉塞或硅膠塞后用石蠟-凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。

        2．二氧化碳培養(yǎng)

        某些細(xì)菌，在初次分離時，須在5%~10%二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)才能生長。常用的培養(yǎng)法如下。

        ①二氧化碳培養(yǎng)箱法：二氧化碳孵箱能自動調(diào)節(jié)二氧化碳的含量、溫度和濕度，培養(yǎng)物置于孵育箱內(nèi)閣，孵育一定時間后可直接觀察生長結(jié)果。

        ②燭缸培養(yǎng)法：取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器，將接種好的培養(yǎng)基放入缸內(nèi)，點燃蠟燭后放在缸內(nèi)稍高于培養(yǎng)物的位置上，缸蓋或缸口均涂以凡士林，加蓋密閉。因缸內(nèi)蠟燭燃燒氧逐漸減少，數(shù)分鐘后蠟燭自行熄滅，此時容器內(nèi)二氧化碳含量約占5%~10%。將缸置于35℃普通孵育箱內(nèi)孵育。

        ③氣袋法：選用無毒透明的塑料袋，將已接種標(biāo)本的培養(yǎng)皿放入袋內(nèi)，盡量祛除袋內(nèi)空氣后將開口處折疊并用彈簧夾夾緊袋口。使袋呈密閉狀態(tài)，執(zhí)斷袋內(nèi)已置的二氧化碳產(chǎn)氣管（安瓿）產(chǎn)生二氧化碳，數(shù)分鐘內(nèi)就可達(dá)到需要的二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境，置于35℃孵育箱內(nèi)孵育。

        ④化學(xué)法：常用碳酸氫鈉-鹽酸法。按每升容積稱取碳酸氫鈉0.4g與濃鹽酸0.35ml比例，分別置容器內(nèi)，連同容器置于玻璃缸內(nèi)，蓋緊密封，傾斜缸位使鹽酸與碳酸氫鈉接觸而生成二氧化碳。于35℃孵育箱內(nèi)孵育。

        3．微需氧培養(yǎng)

        微需氧菌培養(yǎng)在大氣中及無氧環(huán)境中均不能生長，在含有5%-6% 氧氣，5%-10%二氧化碳和85%氮氣的氣體環(huán)境中才可生長，將標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上，置于上述氣體環(huán)境中，35℃進(jìn)行培養(yǎng)即微需氧培養(yǎng)法。

        4．厭氧培養(yǎng)

        厭氧菌對氧敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環(huán)境。厭氧培養(yǎng)常用的方法有：物理法、化學(xué)法、生物法。如厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。